Гистологическое исследование биопсийного материала что это такое
Как проводится гистологическое исследование: виды, методы, особенности
Злокачественные новообразования — это группа заболеваний, насчитывающая несколько тысяч видов опухолей разных типов и разной степени злокачественности. Они подразделяются на большие группы в зависимости от того из каких тканей они развиваются: если из эпителиальных (барьерных) — то это раки, если из соединительных тканей (мягких тканей и костей) – саркомы, если из лимфоидных (иммунных) – лимфомы/лейкозы. От того насколько правильно верифицирована опухоль (определен ее тип, степень злокачественности и другие характеристики) зависит правильность и эффективность лечения. Важную роль в этом играют гистологические исследования.
О том, как проходят гистологические исследования, какие задачи кроме диагностических они позволяют решать, что влияет на сроки их выполнения рассказывает заведующая патологоанатомическим отделением с прозектурой НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова, к.м.н. Анна Сергеевна Артемьева.
Что служит материалом для патоморфологических (гистологических) исследований?
Процесс получения фрагмента ткани (биоптата) — биопсия – это несколько разных способов забора материала для гистологического исследования.
Биопсию внутренних органов делают под УЗИ-навигацией, либо с помощью хирургического вмешательства.
Как обрабатывают эти материалы для проведения гистологического исследования?
1 Этап. Фиксация — «консервирование» биоптата в формалине — специальном химическом растворе, который предотвращает гниение, позволяет сохранить структуры ткани.
Фиксация биоптата может занимать от 6 до 24 часов – в зависимости от его вида и размера.
Операционный материал фиксируется дольше, в несколько этапов. Сначала предварительная фиксация, которая занимает примерно 12 часов. Затем вырезка нужных фрагментов и повторная фиксация еще 24 часа.
Соотношение объема материала к объему формалина должно быть 1:20.
2 Этап. Процессинг — процесс обезвоживания, обезжиривания и пропитки материала парафином. Автомат перемещает кусочек материала из раствора в раствор.
В качестве растворов применяются: абсолютированный изопропиловый спирт (6-8 смен), ксилол (2 смены), расплавленный парафин (2 смены).
Программа разнится для «жирного» материала (к которым относятся, например, ткани молочной железы) и «нежирного» – 36 и 24 часа соответственно.
Процесс получения парафиновых блоков.
3 Этап. Изготовление парафинового блока. Кусок материала помещается в форму с расплавленным парафином (уже другим нежели во время процессинга – с более высокой температурой плавления) и охлаждается. Выполняется вручную, сложно ускорить.
4 Этап. Изготовление срезов. Толщина образца — кусочка ткани, залитого в парафин – 1-3 мм. Толщина каждого среза 4-5 мкм (0,004-0,005 мм). Выполняет лаборант с использованием специального инструмента – микротома.
Срезы монтируются на стекла и должны высохнуть.
Несмотря на то, что часть материала теряется при выравнивании в микротоме, при должном профессионализме, из одного образца — материала от одной биопсии, операционного материала от одной опухоли, возможно изготовить около 100 стекол (микропрепаратов).
Для чего делаются срезы?
Срезы делаются для рутинной окраски гематоксилинном и эозином, иммуногистохимического исследования и других видов исследований.
Срезы для всех исследований используются одинаковые, различается окраска, могут отличаться стекла, на которые они монтируются, так для ИГХ и FISH нужны специальные адгезивные стекла или заряженные стекла.
Блоки и стекла способны храниться долгие годы и использоваться для проведения дополнительных гистологических исследований, пересмотров, а также в научных целях.
Архив гистологических материалов собирается в НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова с 1927 года и содержит более 10 млн единиц хранения (микропрепараты — стекла, парафиновые блоки, архивные карточки, влажный архив).
Какие виды гистологических исследований наиболее информативны?
Что позволяют определить разные виды гистологических исследований
Гистологическое исследование – что это такое?
Позволяет верифицировать опухоль – то есть определить из каких клеток она состоит (из какой ткани она развивается), степень ее дифференцировки (зрелости).
Рутинная окраска, выполняющаяся при гистологическом исследовании, позволяет выявить патологический процесс в анализируемом материале (биоптате, операционном материале):
Также, в большинстве случаев, благодаря рутинной окраске, можно определить степень злокачественности опухоли и, если она достаточно зрелая, то какова ее природа.
Окрашенные срезы под микроскопом
 |
Инвазивный протоковый рак er 100%.
Карцинома сигмовидной кишки.
Крупноклеточная нейроэндокринная опухоль.
МТС крупноклеточной нейроэндокринной опухоли.
Неспецифический рак молочной железы. Участок in situ карциномы внутри протока, криброзного типа.
Низкодифферинцированный рак пищевода.
При гистологическом исследовании биоптата и операционного материала можно оценить распространенность: размер опухоли и прорастание в окружающие ткани, насколько затронуты лимфоузлы и есть ли метастазы в отдаленные органы (если эти все структуры присланы для гистологического исследования). При консультации готовых микропрепаратов – стекол, это, как правило, невозможно, если опухоль больше размеров гистологической кассеты или рассечена предыдущим исследователем и не предоставлены данные макроскопического исследования.
Во время гистологического исследования изучаются все стекла от одного образца – материала, полученного от одного вмешательства — одной операции или одной биопсии, вне зависимости от их количества, это считается одной консультацией.
Сроки выполнения гистологического исследования зависят от количества микропрепаратов и от категории сложности того процесса, который в них обнаруживается, сроки могут удлиняться, особенно при необходимости использования дополнительных методов исследования и анализа дополнительных сведений. На сроки выполнения гистологического исследования влияет полнота предоставленной пациентом клинической информации, в том числе данных уже проведенных исследований.
Иммуногистохимия (ИГХ)
Сложное многоэтапное исследование, выполняется после гистологического исследования на том же материале. Опухолевые срезы окрашиваются антителами, которые способны связываться антигенами (белками), которые несут опухолевые клетки. Разные опухолевые клетки несут разные антигены, к каждому из которых подобно ключа к замку подходит антитело.
Один из этапов ИГХ
ИГХ исследование — это комбинаторика. 100% специфичных и чувствительных к какой-то опухоли маркеров не существует, но есть набор антигенов, которые в определенном типе опухоль должны быть и набор тех, которых там быть не должно, таким образом ИГХ-панель строится так чтобы включать несколько антител, которые должны быть позитивны и несколько, которые должны быть негативны. Для разных опухолей различаются эти наборы позитивных/негативных маркеров.
При проведении прогностической ИГХ – выявлении маркеров чувствительности к терапии определяется набор таких маркеров для конкретных опухолей, например, рака молочной железы: рецепторы стероидных гормонов (эстроген, прогестерон), рецептор эпидермального фактора роста (HER2) и индекс пролиферативной активности Ki67 (скорости деления клеток).
Стекла окрашиваются последовательно — различными антителами красятся наборы маркеров в несколько этапов, процесс окраски стекол одним антителом занимает 48 часов.
Таким образом, каждое антитело наносится на отдельный срез ткани, монтированный на отдельное стекло, как правило с соответствующим внешним контролем, количество реакций (используемых антител) и этапов окраски может существенно варьировать в зависимости от конкретной диагностической ситуации, все зависит от индивидуальных особенностей опухоли. Проводится такое количество окрасок, которое необходимо для того, чтобы выявить наиболее характерный для определенной опухоли набор позитивных и негативных маркеров.
Кому-то для этого будет достаточно 5 антител, а кому-то необходимо сделать 20 окрасок и более. Максимальное количество окрасок, которое нам приходилось делать – 212.
Поэтому точные сроки и стоимость этого исследования невозможно определить заранее. Разные по течению и прогнозу опухоли могут быть очень похожи друг на друга, только минимальные различия в окрашивании, с учетом клинических данных и данных других методов обследования, могут позволить установить верный диагноз.
Есть целый ряд доброкачественных опухолей, симулирующих злокачественные, в том числе высокоагрессивные, а некоторые злокачественные высоко дифференцированные опухоли трудно отличить от воспалительных и реактивных процессов. В таких ситуациях только опыт и квалификация патоморфолога, анализ всего комплекса доступной информации (снимки КТ, МРТ, рентген, протокол операции, и др.) позволяют поставить диагноз.
В грамотной интерпретации результатов ИГХ очень важна роль эксперта, ведь те случаи, с которыми приходится работать, в большинстве своем, сложные. Практически не существует антител, которые могут выступать в качестве 100%-х маркеров той или иной опухоли, врачу всегда приходится взвешивать различные вероятности.
Что определяется с помощью ИГХ?
Иммуногистохимия позволяет оценить потенциальный темп роста опухоли, ответ на химио-, таргетную, гормональную терапию.
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH-тест)
Это метод молекулярно-генетической диагностики в ткани.
FISH проводится в срезе ткани и позволяет привязать генетическую перестройку к конкретной опухолевой клетке.
В этом тесте также используются специальные красители, которые связываются только с определенными участками хромосом. Их называют зондами, которые могут быть помечены флуоресцентным или хромогенным красителем, визуализирующимися при помощи флуоресцентного или светового микроскопа.
Технические операции по подготовке гистологических стекол к этому исследованию занимает 2 рабочих дня.
Анализ препарата с помощью многоголового микроскопа.
Полученные микропрепараты очень чувствительны к внешней среде – они могут выцвести со временем, чтобы избежать потерь информации все FISH-препараты сканируются, создается их цифровая копия, которая доступна для внешнего пересмотра. Специалисты просматривают флуоресцирующий материал в темном поле, в анализе препарата принимают участие как минимум 2 специалиста. При необходимости используется и цифровой анализ.
Что определяется с помощью FISH-теста?
FISH-тест позволят диагностировать некоторые виды опухолей, определяет целесообразность использования некоторых химиотерапевтических препаратов.
Проведение гистологического исследования, и в первую очередь FISH-теста — это экспертная работа, которая зависит от квалификации специалиста. Очень многие мутации, которые выявляются в опухолях, не всегда являются метками опухолей, они могут находиться и в доброкачественных образованиях или нормальных тканях.
За год патологоанатомическое отделение НМИЦ онкологии имени Н.Н. Петрова выполняет около 20000 гистологических исследований (пациентов), из них около 5000 консультативных случаев (пересмотров), более 30000 ИГХ исследований, а также участвует в программе внешнего контроля качества ИГХ исследований NordIQ.
Специалисты отделения обладают огромным опытом проведения гистологических исследований и экспертными компетенциями.
Скорость выполнения гистологических исследований и адекватность гистологического заключения зависят от ряда факторов:
После выполнения гистологического исследования пациент получает гистологическое заключение/протокол исследования гистологического материала.
Расшифровка гистологического исследования: на что обратить внимание?
Гистологическое заключение включает в себя несколько рубрик (полей):
Макроскопическое описание
Заполняется как для биоптатов — не обязательно, так и для операционного материала, для которого имеет крайне важное значение в ряде случаев.
Микроскопическое описание
Описание изменений на микроскопическом уровне, не обязательно к заполнению, так как вся необходимая информация может быть отражена в поле «заключение».
Результаты иммуногистохимического исследования
В этом поле описано какие антитела использовались в данном случае и каков результат окрашивания: наличие окрашивание или его отсутствие, локализация в клетке при необходимости, а также процент позитивных клеток и интенсивность реакции, когда это имеет значение.
Патологоанатомическое заключение
Содержит нозологическую/классификационную единицу, если ее возможно установить по исследованному материалу, то есть дает ответы на вопросы:
Также приводятся все необходимые прогностические данные: степень дифференцировки, параметры, влияющие на стадию, состояние краев резекции, если возможно их оценить и т.п.
Дополнительные замечания и рекомендации
Поле может содержать комментарии, относительно возможного направления дальнейшего обследования, вероятности того или иного диагноза, необходимости ознакомиться с теми или иными клиническими данными и др.
Мы не рекомендуем пациентам самостоятельно заниматься расшифровкой показателей гистологического исследования, используя информацию, полученную на различных Интернет-сайтах и форумах пациентов, так как на интерпретацию данных влияет большое количество факторов, в том числе, возраст пациента, данные других исследований и др.
Расшифровкой исследования может заниматься только специалист – врач онколог по профилю заболевания!
Авторская публикация:
АРТЕМЬЕВА АННА СЕРГЕЕВНА
заведующий патологоанатомического отделения с прозектурой ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России, кандидат медицинских наук
Гистологическое исследование биопсийного материала
Гистологическое исследование биопсийного материала проводят после различных эндоскопических процедур и операций со взятием образца на анализ. Его задача состоит не только в обнаружении раковых клеток, но и любых патологических изменений в тканях. Гистологическое исследование помогает установить точный диагноз и назначить эффективное лечение.
Для чего назначается
Гистологическое исследование – это микроскопическое изучение биоматериала, взятого в патологическом очаге больного. Это самый точный метод для обнаружения опасных клеток, он является обязательной процедурой в обследовании пациента с подозрением на онкологию. Ценность его результатов несравнима с ультразвуковым исследованием или рентгеном.
Задачи гистологического исследования:
Для получения подробной консультации необходимо записаться на прием к узкому специалисту в медицинский центр. Врач определит целесообразность биопсии и вид вмешательства.
Цена исследования напрямую зависит от сложности процедуры.
Подобные процедуры планируются заранее (кроме срочной биопсии во время операции). Манипуляции по взятию биоматериала для исследования требуют подготовки пациента.
Биопсия проводится с применением анестезии, поэтому перед процедурой нельзя есть и пить. Необходимо сделать анализ крови на наличие ряда инфекций. Пациенту даются рекомендации по поводу исключения определенных препаратов за несколько дней до исследования.
Клиники используют несколько способов взятия биопсийного материала на гистологическое исследование.
Методика забора биоптата
Взятие материала толстой полой иглой путем пункции патологического очага. В результате манипуляции получают столбики тканей.
Отсечение части органа или опухоли в ходе хирургической операции.
Отсасывание содержимого вакуумом из патологических образований, например, миомы матки или узлов в щитовидке.
Иссечение целого органа или новообразования с последующим вырезанием из него фрагментов для анализа.
Взятие образца специальными биопсийными щипцами при бронхоскопии, колоноскопии, ФГДС и т. д.
Процедура соскабливания со стенок естественных и патологических полостей, например, матки. Полученный материал отправляется в лабораторию.
Используется чаще всего в гинекологии. Подразумевает взятие мазка со слизистой.
В медицине существуют и другие методы забора биоматериала для гистологии.
Техника проведения процедуры
Лаборатории используют два метода реализации гистологического исследования:
Первый используется в плановом порядке, второй – во время хирургических вмешательств.
Традиционный способ
Этот метод применяется при плановой биопсии, срок получения результатов – 5-7 (иногда 10-14) дней. Образцы тканей окрашиваются специальными составами, что позволяет различить элементы клеток или ткани. Ядра окрашивают одним цветом, а для цитоплазмы используют контрастный краситель.
Далее образцы заливаются расплавленным парафином и нарезаются на микрослои толщиной 1-8 микрон. Полученные пластины наносят на предметное стекло, подсушивают и изучают под микроскопом. Одно из главных преимуществ традиционного метода в том, что образцы на стекле хранятся неограниченное время и пациент может их получить на руки. При желании можно перепроверить диагноз.
Срочный способ
Ускоренный метод позволяет исследовать образцы в течение 1 часа. Такой способ ценен, когда хирург должен принять незамедлительное решение об удалении или сохранении органа оперируемого больного. Биоматериал не обрабатывается парафином. Его замораживают, послойно насекают, помещают на предметное стекло и окрашивают. Затем образцы изучают под микроскопом.
Правила забора материала
Достоверность результатов гистологического исследования во многом зависит от соблюдения правил забора биоптата.
Общие нормы по сбору и хранению биоматериала:
Расшифровка результатов
Врач-патоморфолог составляет заключение с подробным описанием обнаруженных морфологических изменений в тканях и выносит предварительный диагноз.
Пациенту на руки выдается бланк-заключение с развернутым описанием результатов патоморфологического исследования. Не рекомендуется самостоятельно интерпретировать полученные данные. Расшифровка результатов гистологии, постановка окончательного диагноза и назначение лечения исключительно в компетенции квалифицированного врача.
Результаты подобных исследований практически не содержат погрешностей и дают исчерпывающую информацию для постановки диагноза. За исключением случаев, когда собран недостаточный объем биоматериала или изменения в тканях незначительны. Также ошибки возможны при неправильном заборе и хранении биоптата.
Гистологическое исследование
По данным Всемирной организации здравоохранения, ежегодно в мире диагностируют 10 млн новых случаев рака (в России – 0,5 млн). Важную роль в лечении занимает своевременность обращения к врачу и качество диагностических исследований. К наиболее важным и информативным методам диагностики рака относится гистология опухоли. Экспертное исследование в условиях лаборатории с новейшим оборудованием позволяет поставить точный, объективный диагноз и составить эффективную программу лечения.
Что представляет собой гистологическое исследование
Гистологическая диагностика обязательно входит в программу обследования пациентов с подозрением на онкологию перед операцией, химиотерапией, лучевой терапией. Данный вид исследования предполагает непосредственное изучение тканей новообразования для подтверждения или опровержения онкологического диагноза. Забор тканей осуществляют из внутренних органов и тканей пациента в очаге поражения. Затем биообразцы обрабатывают и изучают в лаборатории под микроскопом.
Метод дает возможность:
Его применяют при онкозаболеваниях органов ЖКТ, кожи и мягких тканей, молочной и щитовидной желез, органов грудной клетки, а также при онкоурологических, онкогинекологических болезнях.
Зачастую гистологические исследования тканей дополняют цитологической диагностикой, в ходе которой врачи изучают отклонения в структуре и функциях клеток. В ряде случаев для проведения цитологии достаточно взять мазок (например, с тканей матки), смыв или образец жидкости. Гистологический же метод связан с необходимостью забора биоматериала из внутренних органов.
В каких случаях проводят гистологическое исследование материала
Гистологию проводят в случаях, когда необходимо:
Заменить гистологическое исследование другими методами невозможно. Его могут назначать в комплексе с обзорной и контрастной рентгенографией, УЗИ с допплерографией, МРТ и КТ, эндоскопическим исследованием, радионуклидной диагностикой, а также лабораторными анализами.
Хотите мы вам перезвоним?
Методы гистологического исследования
Основной метод забора биоматериала из внутренних органов – биопсия. Ее проводят несколькими методами.
Специальной подготовки к гистологии не требуется. Забор биоматериала проводят натощак, чаще всего утром. Процедура проходит под местным наркозом, поэтому не вызывает болезненных ощущений. Если новообразование расположено в кожных покровах, достаточно седативных (успокаивающих) средств.
Все методы биопсии абсолютно безопасны для организма и связаны с минимальным травматизмом. Проводят процедуру под визуальным контролем врача посредством УЗИ, что исключает риск повредить органы.
Преимуществом биопсии является минимальное количество противопоказаний. К ним относят проблемы со свертываемостью крови, аллергическую реакцию на анестетики, сердечную недостаточность высокой степени тяжести. Женщинам не проводят процедуру в случаях, если она угрожает беременности.
Как проходит исследование
Лабораторное гистологическое исследование биопсийного материала проводят традиционным и ускоренным способом. Традиционно биоматериал проходит специальную обработку для сохранения формы. Его уплотняют и нарезают на пластины толщиной в несколько микронов для исследования под микроскопом. Результат можно получить в течение 7–10 дней.
Ускоренный способ применяют в случаях, когда биопсию проводят во время операции. Онкохирургу нужен результат исследования, чтобы определить – сохранять ткани или удалять их. В этом случае биообразец в течение 1 часа замораживают, разделяют и микроскопируют.
В онкологии применяют несколько видов микроскопирования:
В заключении специалист подробно описывает свойства всех видов тканей, которые были обнаружены в биообразце. Расшифровать результаты гистологии может только квалифицированный врач-онколог.
Возможны ли ошибки при исследовании?
Есть 4 основных условия, которые могут повлиять на результаты гистологии.
Если все условия соблюдены, то риск ошибки сводится к нулю.
Где пройти гистологическую диагностику
Данное исследование можно пройти в онкологическом центре «СМ-Клиника» в условиях стационара или амбулаторно.
Внимательные врачи детально разъяснят результаты исследования и предложат индивидуальную программу лечения. Записаться на прием можно на сайте или по телефону: +7 (495) 777-48-49
Гистологические исследования
Гистологическое исследование биопсийного материала — микроскопическое изучение биологического материала, взятого из тканей органа, в котором было обнаружено новообразование. Гистология является неотъемлемой частью комплексного обследования для того, чтобы подтвердить или опровергнуть промежуточный диагноз, а также для изучения динамики патологического процесса.
Когда назначают гистологическое исследование?
Забор образца требуется для того, чтобы решить ряд задач:
Кроме того, гистология позволяет наблюдать и контролировать изменения в тканях после лучевой и цитостатической терапии.
Гистологическое исследование активно применяется в гинекологии, гастроэнтерологии, пульмонологии, оториноларингологии, при этом данные лабораторного тестирования применимы для дальнейшего лечения как мужчин, так и женщин.
Администрация АО «ЦЭЛТ» регулярно обновляет размещенный на сайте клиники прейскурант. Однако, во избежание возможных недоразумений, просим вас уточнять стоимость услуг по телефону: +7 (495) 788 33 88
Как происходит забор материала?
Биопсия — хирургический метод, с помощью которого извлекается образец ткани из области поражения. Биопсия является одним из основных способов диагностики в комплексе ультразвукового исследования, рентгена, магнитно-резонансной томографии, КТ.
Данный метод позволяет диагностировать гепатит, патологические процессы щитовидной железы и толстой кишки, неврологические, гинекологические и урологические заболевания.
В процессе хирургического вмешательства могут быть полностью или частично извлечены:
Существует несколько основных способов взятия биоматериала:
Биопсия проводится в открытой форме, при которой материал для исследования получают на основе мазка и смыва. Для процедуры может использоваться также рентгенография, УЗИ. В зависимости от того, производится ли только забор образца или полное иссечение органа, биопсия носит диагностический или лечебный характер. Данные лабораторного исследования используются в гистологии и цитологии.
Расшифровка результатов
По результатам гистологического исследования оцениваются размеры взятого материала, его цвет, свойства и концентрация, а также патологические изменения в тканях, их атипичного роста и так далее.
Недостаточное количество биоматериала или отсутствие в нем патологии может дать ложноположительный результат, поэтому необходимо соблюдать правила забора исследуемого образца.
Изучение результатов гистологии входит в обязанности патологоанатома или патоморфолога. Они изучают историю болезни пациента и на основе клинических данных составляют заключение. В случае однозначных итогов лабораторных тестов, специалисты ставят окончательный диагноз. Спорные случаи врачи обсуждают на консилиуме.
Диагноз устанавливается согласно нормам ВОЗ или министерства здравоохранения страны.
Длительность гистологического исследования обычно длится от 1 недели, если образец был взят из мягких тканей и около 2 недель, если это образец костных тканей.
Транспортировка биоматериала сопровождается записью в специальном журнале и производится в тщательно упакованной таре ответственным лицом для передачи лаборанту.