Входной фрит колонки что это

Входной фрит колонки что это

К технике выполнения любых хроматографических определений предъявляются некоторые общие требования. Прежде всего, необходимо отметить те из них, которые вызывают у начинающих специалистов больше всего вопросов.

1. Кондиционирование помещения. В помещении, где устанавливается жидкостной хроматограф, не должно быть резких колебаний температуры.
Изменение температуры может привести к изменению удерживания, эффективности, и даже селективности разделения.
В летнюю жару в некондиционированных помещениях сильно затрудняется работа с нормально-фазовыми легкокипящими подвижными фазами. В течение дня происходит их постепенное испарение, которое приводит к изменению состава элюента.
При пониженных температурах появляются проблемы в работе с элюентами, обогащенными водой и/или содержащими спирты. Вязкость таких элюентов резко возрастает при понижении температуры, что приводит к повышению давления в системе.
Влияние небольших колебаний температуры на разделение можно устранить, термостатируя хроматографическую колонку, или всю жидкостную систему (что возможно не для всех хроматографов).

2. Качество электропитания. Большинство современных хроматографов оснащено системами стабилизации питания, однако, качество электропитания на месте также должно быть высоким. При недостаточно хорошем электропитании любой запуск серии определений в автоматическом режиме может окончиться неудачей из-за сбоя.

3. Чистота растворителей. Для приготовления подвижных фаз следует применять особо чистые растворители.
В общем случае, требования, предъявляемые к чистоте подвижной фазы, зависят от способа детектирования, метода элюирования (изкратического или градиентного), чувствительности детектора к целевому аналиту и его концентрации.
При применении УФ детектирования требования к чистоте растворителей повышаются при переходе к коротковолновому диапазону, менее 230-240 нм. Для изократического элюирования при УФ детектировании на длинах волн, больших 220-240 нм, можно применять растворители марки «ос.ч.» и воду-дистиллят. Все реагенты, добавляемые в подвижную фазу, также должны быть достаточно чистыми; кристаллические реагенты перед применением бывает полезно перекристаллизовать.
Для градиентного элюирования необходимо применять растворители марки «для жидкостной хроматографии» («for liquid chromatography») и воду-бидистиллят. Особые требования в методе градиентного элюирования (в обращенно-фазовой хроматографии) предъявляются к чистоте водного буфера и воды в частности. Прежде всего это связано с тем, что на начальной стадии элюирования адсорбент поглощает из обогащенной водным буфером подвижной фазы загрязняющие компоненты, которые в дальнейшем элюируются и проявляются на хроматограмме в виде «горбов», «порогов» и отдельных пиков, сильно затрудняющих выделение полезных сигналов аналитов.
Наиболее чистые растворители требуются для проведения групповых определений следовых количеств веществ в режиме градиентного элюирования.
Для выполнения определений в градиентном режиме элюирования, а также прецизионных определений в изократическом режиме, подвижная фаза должна применяться однократно, то есть элюат должен сбрасываться или утилизироваться.
При изократическом элюировании, если нет особенных проблем с чувствительностью, отработанный элюент можно применять повторно. Система, в которой элюат после прохождения через детектор поступает обратно в емкость с подвижной фазой, называется «системой с рециклом». Особенно полезной такая система оказывается в случае проведения большого числа рутинных изократических определений на стандартных колонках (250х4.6, 150х4.6) при объемной скорости порядка 1 мл/мин. В этих случаях система с рециклом обеспечивает экономию до 200-300 мл органического растворителя в день. Такая экономная система позволяет применять для анализа очень чистые, дорогие растворители. Вопрос экономии дорогих растворителей стоит менее остро в случае применения микроколонок (80х2, 100х2), поскольку для проведения разделения требуется на порядок меньший объем подвижной фазы.

4. Дегазация растворителей. Растворители, применяющиеся в хроматографии для приготовления подвижных фаз, обычно содержат растворенный воздух. Особенно много воздуха содержит вода.
При работе на недегазированных элюентах пузырьки воздуха попадают в различные узлы жидкостной системы: насос, колонку, капилляры, детектор. При попадании воздуха в жидкостную систему на хроматограмме появляются высокие периодические шумы, вызванные колебанием давления в жидкостной системе. Это приводит к резкому уменьшению чувствительности анализа.
Для удаления воздуха их элюента проводят его дегазацию. Как правило, дегазируют только элюенты для обращенно-фазовых разделений – поскольку водноорганические смеси содержат значительные количества растворенного воздуха. Особенно тщательно дегазация должна осуществляться в случае градиентного элюирования, а также при применении флуориметрического детектирования.
В ходе градиентного элюирования в обращенно-фазовом режиме происходит смешивание двух элюентов – водноорганических смесей различного состава. Смешивание недегазированных элюентов приводит к интенсивному выделению растворенного воздуха, что критично для проведения определения в целом (на хроматограмме пузырьки воздуха регистрируются в виде резких «выбросов» на нулевой линии).
Чувствительность флуориметрического детектирования уменьшается при высоком содержании растворенного воздуха в подвижной фазе (происходит тушение флуоресценции). Такиим образом, при применении флуориметрического детектирования дегазации элюента должно уделяться особое внимание.
Существует три основных способа дегазации подвижных фаз для жидкостной хроматографии.

а. Дегазация вакуумом – элюент выдерживают в колбе Кляйзена под вакуумом водоструйного насоса в течение нескольких минут. При проведении дегазации следует избегать кипения элюента.
б. Термическая дегазация применяется для дегазации водноорганических элюентов с высокой долей воды. Подвижную фазу помещают в колбу, которую не герметично закрывают пробкой, и оставляют в водной бане при температуре около 50ºС. Через 10-15 минут колбу закрывают пробкой герметично и охлаждают ее под струей воды до комнатной температуры.
в. Дегазация ультразвуком. Подвижную фазу несколько минут обрабатывают ультразвуком, а затем дают ей остояться в течение 10-15 минут. Этот способ часто бывает недостаточно эффективен для дегазации водноорганических элюентов.

Современные насосные системы для жидкостной хроматографии комплектуются системами автоматической дегазации. Тем не менее, при проведении градиентных анализов обе подвижные фазы лучше дегазировать предварительно и «вручную», по одному из приведенных методов.

5. Фильтрация подвижной фазы. Для обеспечения бесперебойной работы насоса подвижную фазу желательно фильтровать под вакуумом с применением мембранного фильтра.

6. Промывка колонки и узлов жидкостной системы. После работы с водноорганическими подвижными фазами, содержащими соли и кислоты, всю жидкостную систему (включая колонку) следует промыть дистиллированной водой с добавлением 5-10% органического растворителя. Такая промывка делается для того, чтобы в нерабочее время дополнительно не изнашивались узлы жидкостной системы хроматографа и сама неподвижная фаза.
Не проведение такой промывки приводит, прежде всего, к тому, что после остановки насоса на его деталях и стенках кюветы детектора из элюента осаждаются соли. Это, в свою очередь, приводит к неустойчивой работе прибора в целом, а также преждевременному износу движущихся частей насоса. Регулярное отсутствие промывки системы от содержащих соли и кислоты элюентов может привести к сокращению времени жизни неподвижной фазы.
Добавка к промывочной воде некоторого количества органического растворителя необходима для предотвращения биологического загрязнения жидкостной системы.

7. Переход на новую подвижную фазу, которая не смешивается с предыдущей. Такой переход осуществляется через промежуточный растворитель, неограниченно смешивающийся с обеими подвижными фазами – обычно, через изопропанол или ацетон.
Для перехода с водного элюента на неполярный элюент жидкостную систему следует промыть водой с добавкой органического растворителя, затем снять хроматографическую колонку, промыть систему изопропанолом (ацетоном), промыть систему неполярным элюентом, установить новую колонку.
Для обратного перехода снимают хроматографическую колонку, промывают жидкостную систему изопропанолом (ацетоном), затем водным элюентом, затем ставят новую колонку.
При переходе от водного элюента к неполярному следует заранее убедиться, что материал уплотнений насоса рассчитан на работу с неполярными растворителями.

8. Фильтрация пробы. Если анализируемая проба содержит нерастворенную взвесь, то ее желательно отфильтровывать, пропуская пробу через мембранный фильтр, соединенный со шприцем. К сожалению, если пробы мало, менее миллилитра, то профильтровать ее таким способом становится практически невозможно.
При регулярном анализе проб, содержащих взвеси, входной фильтр на колонке (фрит) может засориться, что приведет прежде всего к увеличению давления в системе. В этом случае входной фильтр лучше заменить, а при отсутствии замены – промыть его в органическом растворителе с обработкой ультразвуком в течение 10-15 минут.
Наиболее оптимальным решением проблемы является применение ин-лайн фильтра перед колонкой. Ин-лайн фильтр содержит сменный фрит – такой же, как и на колонке. Замена фрита на ин-лайн фильтре является рутинной операцией, которая может проводиться достаточно часто.

9. Применение предколонок. При регулярном анализе «грязных» проб хроматографическая колонка достаточно быстро загрязняется и теряет свою разделительную способность. Известной альтернативой тщательной пробоподготовки в этом случае является применение предколонки, защищающей основную колонку от загрязнения.
Иногда пробоподготовку целесообразно вообще не проводить, а поставить в линию перед основной колонкой ин-лайн фильтр и предколонку. Преимуществами этой схемы являются простота и экспрессность анализов при меньшей затрате труда и реагентов.

10. Консервация хроматографических колонок. Перед достаточно длительным хранением хроматографические колонки промываются и заполняются растворителем, вполне определенным для каждого типа неподвижной фазы.
Так, хроматографические колонки для работы в нормально-фазовых системах обычно заполняются высококипящим углеводородом, например, изооктаном. Обращенные фазы промывают водой и заполняют ацетонитрилом, или на небольшой скорости подачи – изопропанолом. Фазы, предназначенные для работы с водными буферами, заполняются водой с небольшой добавкой азида натрия (бактериостатика).
Инструкции по хранению колонки могут указываться в ее паспорте.

11. Хранение водных буферов. В случае проведения рутинных определений бывает достаточно удобно готовить сразу большой объем водного буфера для приготовления подвижной фазы. К сожалению, водный буфер не может храниться больше нескольких дней, если не добавить в него азид натрия, бактериостатик. Очень плохо хранятся подвижные фазы на основе фосфатного буфера.
Иногда большой объем водного буфера готовят для того, чтобы «повысить воспроизводимость анализа». Вообще говоря, при таком подходе вопроизводимость анализа не повышается, а вот проблемы с хранением буфера появляются неизбежные.
Вообще же говоря, ответ на вопрос – готовить ли водный буфер на неделю или на один день? – определяется исключительно принципом удобства.

12. Регулярность проведения калибровки. Как правило, калибровку по стандарту проводят каждый день, или же каждый раз при приготовлении нового элюента.
Калибровка проводится при достижении стационарного состояния хроматографической системы; считываемыми параметрами являются время удерживания пика стандарта, его площадь (при спектрофотометрическом детектировании – на опорной длине волны), спектральные отношения (при применении сканирующего или диодно-матричного спектрофотометрического детектора).
В начале работы стандарт может быть проанализирован дважды – для подтверждения воспроизводимости времени удерживания.

Источник

Принципы аналитической хроматографии

Принципиальная схема аналитического хроматографа

Все виды колоночной сорбционной элютивной высокоэффективной одномерной хроматографии реализуются с помощью инструментов, имеющих единую принципиальную схему (рис. 4.1).

Рис.4.1. Принципиальная схема аналитического хроматографа.

Хроматограф состоит из последовательно соединенных между собой тонкими трубками:

· источника подвижной фазы под давлением,

· дозатора для ввода пробы,

Кроме того, используются две вспомогательные системы:

· термостат-печка – для задания и контроля температуры в разделяющей колонке и непосредственно связанных с ней узлах,

· регистрирующее устройство – для записи и обработки экспериментальной информации.

Несмотря на важность для осуществления анализа всех узлов хроматографа, центральным элементом хроматографической системы является разделяющая колонка, а все остальные элементы – вторичны, их назначение: создать необходимые условия для разделения в колонке и осуществить точное и чувствительное определение разделенных фронтов компонентов пробы.

Разделяющая колонка

Разделяющая (хроматографическая, аналитическая) колонка имеет цилиндрическую форму и либо заполнена твердой загрузкой – сорбентом, либо содержит неподвижную фазу на внутренней поверхности стенки. В первом случае колонка является набивной, или насадочной; во втором случае колонка является капиллярной (рис.4.2, 4.3).

Размеры насадочных колонок обычно составляют:

Размеры капиллярных колонок обычно составляют:

· для ГХ: внутренний диаметр 0.05-0.3 мм, длина 5-100 м;

· для ВЭЖХ требуются капиллярные колонки очень малых сечений (диаметр не более 10 мкм), поэтому этот тип колонок практически не используется.

Герметичность резьбовых соединений при высоком давлении обеспечивается за счет конусных поверхностей вставок (например, ферул, надеваемых на капилляр), выполненных из нержавеющей стали или высокопрочного пластика, а также с помощью тефлоновых прокладок.

Входные и выходные патрубки служат для прочного герметичного соединения колонок с соединительными трубками, выдерживающими необходимые для хроматографии давления и температуры.

При приготовлении хроматографических колонок большое значение имеет однородность слоя загрузки и нанесения неподвижной фазы. Это качество достигается специальными методами.

Например, приготовление набивных колонок осуществляется с помощью насосов высокого давления из хорошо взвешенной (вязкой, однородной по плотности частиц и растворителя) суспензии частиц сорбента. Получаемый в результате набивки слой сорбента должен характеризоваться порозностью вблизи значения 0.3.

Нанесение НФ на внутреннюю поверхность капиллярной колонки производится из пара или раствора высокомолекулярного вещества с требуемыми свойствами, пленка которого затем подвергается дальнейшей полимеризации и сшиванию. Толщина пленки НФ должна иметь постоянную величину в интервале от десятых долей до нескольких микрон.

Источник

Входной фрит колонки что это

Ответов в этой теме: 7

	21.04.2011 // 20:20:17 Редактировано 1 раз(а) Здравствуйте! Столкнулись с такой проблемой, может, кто знает, как решить? Имеем хроматограф Милихром-5, но по сути почти Милихром-6, то есть у нас к 5-ке приделан второй насос для градиентного элюирования, термостата колонки правда нет, ну да не важно. Работает уже давно и раньше все было стабильно. Но недавно начались проблемы. После нескольких опытов даже на новой колонке (только что купленной) начинает расти давление, примерно атмосфер до 70. Совершенно непонятно, в чем дело, капилляры нигде не пережаты, грязные пробы не делаем. Пока, конечно, подкрутил винтики калибровки датчиков давления на насосах, чтобы анализ все-таки провести, но с таким давлением работать вроде как нельзя (или можно?), плюс иногда вышибает все же капилляр из соединений. Элюенты: смеси ацетонитрил-вода в разных пропорциях Колонка: Диасфер C10CN 2×80 сорбент 6 мкм (от Биохиммака). У кого есть какие соображения? P.S. Из прошлой колонки думал вынуть фильтр и поменять на новый, но он так и не вывалился из фитинга колонки, в итоге просто выпал сорбент из колонки и все, обидно быть криворуким((
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246
Волгин VIP Member Ранг: 1303	22.04.2011 // 10:49:03 Здравствуйте, тезка! А Вы образцы фильтруете? Не могут ли продукты экстракции полимеризоваться при отгонке эфира или стоянии в сухом виде с образованием смол? Пробовали ли Вы провести несколько холостых анализов (без ввода пробы), если пробовали, растет ли давление? И маленькое замечание: колонки надо хранить плотно закрытыми, тогда влажный сорбент не будет высыпаться.
DSP007 VIP Member Ранг: 2228	22.04.2011 // 11:41:50 Знаете еще что бывает- Иногда игла может «заклепать» тефлоновый уплотнитель колонки. Лучше всего заменить «голову», но при «твердой руке» можно вывинтив поджимной винт с дырой из головы колонки расковырять завальцованую тефлоновую прокладку острием швейной иглы.
Garry VIP Member Ранг: 1076	22.04.2011 // 13:13:34 Редактировано 1 раз(а) Бывает и такой факт, как глубоко посаженная игла, которая достает до фильтра и завальцовывает поры в пористом фильтре, тем самым уменьшая проницаемость и вызывая рост давления на входе в колонку. На фильтр конечно, желательнео поглядеть. Если есть выемка, то нужно приподнять малость иглу контрагайкой до необходимого уровня (чтобы конец иглы не упирался с усилием в фильтр, а просто касался его). Извиняюсь, это актуально для Милихромов, у которых колонка садится в фиксатор самплера, а не через отрезок РЕЕК капилляра.
yurabelkin Пользователь Ранг: 3	22.04.2011 // 14:14:54 Редактировано 1 раз(а) Спасибо всем за обстоятельные ответы! Касаемо пробоподготовки. Нет, фильтрования там нет. Полная пробоподготовка следующая: вино + 1 мл 80% фосфорной кислоты, затем встряхиваем, затем доливаем эфира, затем термостатируем при 30-32 градусах минут 15, затем отбираем верхнюю эфирную фракцию в колбу, колбу подсоединяем к вакуумному насосу и выпариваем эфир. Сухой остаток растворяем в 20% ацетонитриле. Фильтровать по логике, конечно надо) Подскажите, с какой пористостью фильтр следует брать? Схема подсоединения колонки у меня следующая: сначала металлическая «штука», куда «заезжает» игла (это называется инжектор или нет?), далее конструкция из двух полимерных фитингов, соединенных капилляром. Как я понимаю, это переходник на более современный «разъем» для колонок. Таким образом, как мне кажется, совет Garry не касается нашей конструкции (а жаль!). Игла и вправду не совсем прямо попадает в устройство ввода пробы, попробую аккуратненько выправить и немного поднять саму иглу. Что касается холостых анализов. На них тоже давление растет. Притом, что при прокачке чистого ацетонитрила, что при прокачке 8,5% смеси ацетонитрил-вода, давление растет примерно одинаково, казалось бы вязкость различается, ан нет. Есть еще мысль, может и правда глючит датчик давления в насосах? Их недавно как раз разбирали) Насколько безопасно работать на таком давлении? Стоит ли промывать колонку в обратном направлении в таких случаях или нет?
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306	22.04.2011 // 14:43:08 Конечно, всем очень жаль, но помочь здесь вряд ли чем-то можно.. дело и правда, скорее всего, в том, что быстро забился входной фрит колонки.. пробы таких объектов обязательно «откручивать» на настольной центрифужке.. На любом обычном насосе с пределом 400 атм этой мелочи (повышения давления на 20-30 атм) Вы даже бы и не заметили, а на милихроме это приводит к невозможности проводить анализ. Да и термостат был бы очень кстати.. А по большому счету на обычном приборе (не милихроме) все делается втупую вводом вина (после фильтрации). Вот мои картинки, например Источник Геометрия колонок В зависимости от площади поперечного сечения и длины колонки можно разделить на макромасштабные препаративные, препаративные, полупрепаративные, стандартные аналитические колонки, микроколонки и капиллярные колонки. Трубка стандартной аналитической колонки с обеих сторон закрывается фильтрами (фритами), предотвращающими высыпание сорбента из колонки, а также препятствующими разрушению слоя сорбента механическими примесями, писутствующими в пробе или подвижной фазе. С детектором и дозатором колонка соединена стандартными капиллярами с наружным диаметром 1.6 мм. Внутренний диаметр капилляров составляет 0.2-0.3 мм. Фильтры имеют диаметр пор около 2 мкм. Фильтры и капилляры крепятся на колонке штуцерами разной конструкции, в состав фитингов входят также уплотняющие кольца и конусы. Выпускаются также колонки с конструкцией патрона. В этом случае колонка выполнена из полимера и заключена в кожух, в котором создается высокое давление, обеспечивающее плотный контакт частиц сорбента со стенкой колонки за счет частичной деформации последней. Функции фильтров в колонке не ограничиваются удерживанием сорбента, они распределяют поток и пробу, попадающие в начало колонки. Необходимость перехода от малого диаметра в капилляре к большому в трубке самой колонки, высокий перепад давлений на колонке в процессе упаковки и при работе, недопустимость образования мертвых объемов обуславливают конструкционные особенности колонок. Для получения высокой эффективности колонки большое значение имеет высокое качество обработки внутренней поверхности трубки колонки. Классические типы соединения колонок с хроматографическим трактом: Источник Входной фрит колонки что это Книга состоит из подробных ответов на 100 вопросов, наиболее часто возникающих в практике специалиста по высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), работающего в лаборатории контроля качества. Топ-100 вопросов составлены на основе многолетнего опыта автора в методической и технической поддержке пользователей ВЭЖХ оборудования и колонок. Приводимая информация закрывает 80% случаев обращений в сервисные и методиче- ские службы поставщиков ВЭЖХ оборудования, позволяя пользователям легко решать все вопросы собственными силами. Книга полностью заменяет собой все существующие ВЭЖХ курсы начального уровня, поскольку дает ответы на все разбираемые на них типичные вопросы, причем приводимые в книге сведения более подробны и даны на более высоком профессиональном уровне. Изложение ведется в форме диалога условного пользователя с условным специалистом по технической или методической поддержке; подобный подход облегчает восприятие материала книги и делает процесс чтения не только полезным, но и увлекательным. Константин Сергеевич Сычев начал профессиональную карьеру как химик-аналитик в 1998 г., в 2001 г. окончил химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, в 2004 г. получил степень кандидата химических наук по специаль- ности «хроматография и хроматографические приборы» под руководством В.А. Даванкова (изобретателя хиральной ВЭЖХ, лауреата золотой медалиМартина и медали Нернста –Цвета). Направления научной работы (2001–2004 гг.): исследо- вание механизмов удерживания и изучение новых адсорб- ционных материалов для ВЭЖХ и ТФЭ. Основные дости- жения — разработка методологии численного выделения индивидуальных механизмов удерживания из данных по удер- живанию в смешанных режимах, а также первое прямое доказательство связи между удерживанием в режиме с пе- реносом заряда и характеристиками пи-систем адсорбатов. С 2004 г. продолжил профессиональную карьеру как раз- работчик прикладных аналитических методик с примене- нием ВЭЖХ и ТФЭ. В 2008 г. основал компанию «СКАН» (ИП Сычев К.С.), специализирующуюся на разработке ком- мерческих ВЭЖХ методик. В 2011 г. компания запустила проект авторских ВЭЖХ курсов по различным програм- мам, которые пользуются большим успехом и в настоящее время. В 2017 г. основал компанию Integrated BioSeparation Solutions (Эстония), специализирующуюся на разработке ВЭЖХ методик, проведении ВЭЖХ исследований, поставке и об- служивании ВЭЖХ систем с предустановленными ВЭЖХ методиками — фармакопейными и собственной разработки. С 1998 по 2020 гг. опубликовал более 50 статей в рос- сийских и международных реферируемых журналах, стал автором пять книг по ВЭЖХ и подготовке пробы. Автор- ские ВЭЖХ-курсы прослушали более 500 специалистов из более чем 60 компаний. В ближайших планах — развитие брендовой линейки OEM колонок для ВЭЖХ, запуск новых линеек специа- лизированных ВЭЖХ комплексов, работа над новой кни- гой «Применение ВЭЖХ для решения задач фармацевти- ческой, пищевой и аграрной индустрий» и запуск автор- ских курсов на английском языке. Источник ← Входной фильтр при коронавирусе что это Входные данные что это → Вам также понравится Гонартроз 2 стадии коленного сустава что это такое 15.03.202316.03.2023 admin 0 на туе желтеет хвоя что делать 16.03.202325.03.2023 admin 0 Выросла шишка за ухом что это 14.03.202313.03.2023 admin 0 Добавить комментарий Отменить ответ Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены * Комментарий * Имя * Email * Сохранить моё имя, email и адрес сайта в этом браузере для последующих моих комментариев.