Гистология и иммуногистохимия в чем разница
Иммуногистохимическое исследование (ИГХ)
Иммуногистохимия является дополнительным методом исследования, применяемым в патологической анатомии при диагностике доброкачественных и злокачественных новообразований, когда постановка диагноза по гистологическим препаратам не представляется возможной или требуется уточнение клинически важных молекулярных параметров опухоли.
Данная методика основана на выявлении в анализируемом образце ткани белков, специфичных для того или иного вида клеток, что позволяет отличать один вид опухоли от другого, а также выявлять маркеры, отвечающие за лекарственную чувствительность опухолевой ткани.
Зачем нужна иммуногистохимия, если уже сделано гистологическое исследование?
В ряде случаев проведения обычного гистологического исследования биопсии бывает недостаточно, что объясняется следующими причинами:
Например, диагноз практически всех лимфом и лейкозов (более 70 видов!) ставится после ИГХ исследования, а в части случаев дополнительно требуется молекулярно-генетическое исследование; в свою очередь, за гистологическим диагнозом «мелкокруглоклеточная опухоль» может скрываться до 13 различных злокачественных опухолей, каждая из которых имеет свой прогноз и требует индивидуального плана химиолучевого лечения – единственным методом, способным помочь врачу в дифференцировании этой группы опухолей, является ИГХ исследование.
Сроки выполнения ИГХ исследования
В соответствии с п.24 Приказа №179н от 24.03.2016 г. Минздрава России, срок выполнения ИГХ исследования:
Иммуногистохимия
Иммуногистохимия — способ исследования биологического материала после окрашивания с помощью специфических антител, которые связываются с определяемым веществом. Этот метод был разработан еще в первой половине ХХ века и к настоящему времени получил колоссальное развитие.
Выделяют два способа проведения реакции:
Антитела, используемые в иммуногистохимии, могут быть маркированы следующим способом:
Применение технологии в репродуктивной медицине
Иммуногистохимия в репродуктивной медицине применяется для диагностики причин бесплодия и оценки потенциальной эффективности ЭКО. Известно, что беременность при применении вспомогательных репродуктивных технологий наступает у 35–45 % пациенток после первой попытки. Около 30 % пациенток имеют многократные неудачи, причины которых различны, в том числе неблагоприятное состояние эндометрия.
Долгое время для изучения патологии эндометрия использовался гистологический метод исследования. Однако он не позволял достоверно оценить рецептивную способность эндометрия, что породило потребность в поиске более информативных методов диагностики. Одним из них стала иммуногистохимия, которую в настоящее время используют в следующих целях:
Гистологическое исследование опухолей
Точная постановка диагноза «рак» невозможна без проведения гистологического анализа.
Гистологическое исследование опухолей является одним из самых достоверных и важных диагностических методов. Гистологическое исследование проводят врачи-патоморфологи, оценивая под микроскопом материал после биопсии (непосредственно фрагмент опухоли) или же операционный материал (удаленный орган или его часть). В дальнейшем при необходимости используются дополнительные методы исследования (иммуногистохимия (ИГХ) и молекулярные исследования).
Данное исследование проводится как для выяснения происхождения опухоли, так и для определения стратегии будущего лечения. Вероятность назначения неправильного лечения велика при отсутствии информации о том, что из себя представляет обнаруженная опухоль. Нельзя ориентироваться лишь на клиническую картину, результаты методов визуализации (рентген, КТ, МРТ) или анализов крови. Зачастую онколог не знает, с чем имеет дело, и может лишь высказать свои предположения, поставив диагноз со знаком «?». Тогда и назначается биопсия с последующим морфологическим исследованием.
Морфологическое исследование является заключительным этапом в диагностическом поиске и позволяет онкологам безошибочно выбирать между тем или иным курсом химиотерапии, или же совсем от нее отказаться в случае получения заключения о доброкачественном процессе.
Кроме 100% точности диагноза, в отдельных случаях гистологическое исследование позволяет расширить, или же наоборот, ограничить объем хирургического вмешательства. Приведем несколько примеров.
Опухоль молочной железы. Первая мысль, которая возникает у женщины – рак! Да, это возможно, но… Существует ряд оговорок. После какого метода исследования был выставлен диагноз? Если это цитологическое исследование (мазки), то есть высокая вероятность ошибочно выставленного диагноза. Это обусловлено тем, что даже «нормальные» клетки эпителия после нанесения на стекло (грубо говоря «размазывания») могут принимать атипичный вид и вводить цитолога в заблуждение. В таком случае просто необходимо гистологическое или иммуногистохимическое (ИГХ) исследование биоптата («кусочка опухоли») врачом-патологоанатомом, который достоверно выставит диагноз. Ведь вероятность того, что опухоль доброкачественная, также есть. В таком случае удалять всю молочную железу и калечить пациентку нет необходимости, а можно ограничиться лишь секторальной резекцией (удалить лишь пораженную часть железы). Или же в случае получения диагноза «лимфома» (такое тоже возможно), вообще не проводить оперативного вмешательства.
Поражение желудка. Опять же, есть вероятность того, что это рак. Но также не исключена и лимфома. В ее случае нет необходимости удалять желудок, а можно ограничиться лишь химиотерапией.
Все зависит, конечно, от качества материала, взятого для исследования и квалификации патоморфолога. Ни один диагноз опухоли, злокачественной или доброкачественной, не выставляется лишь одним врачом. В таких случаях принцип коллегиального просмотра очень важен. Минимум два мнения и четыре глаза. Ведь то, что видит один врач, может пропустить другой или не обратить на это внимания.
Подводя резюме под вышесказанным, можно выделить несколько последовательных этапов до момента постановки правильного диагноза:
— обращение пациента к клиническому врачу/онкологу;
— полное и всестороннее обследование с выявлением опухолевого очага;
— биопсия/удаление образования с его доставкой в лабораторию патоморфологии для морфологической диагностики;
— вместе с материалом предоставляются как можно более полные клинические данные и результаты методов обследования.
Как уже было сказано выше, финальной точкой в диагностическом поиске для клинических врачей является заключение патоморфолога.
Стоимость и срок исследования
| Наименование | Срок | Стоимость, руб. |
|---|---|---|
| Гистология без иммуногистохимии | от 3 дней | 12 500 |
| Гистология с иммуногистохимией | от 3 дней | 28 300 |
* Организация и оплата доставки сырого материала (не в блоках) осуществляется клиентом.
По всем возникшим вопросам Вы можете проконсультироваться у нашего медицинского администратора по телефону: 8-800-555-92-67 или написать нам в WhatsApp: +7 925 740 05 87
Гистология и иммуногистохимия в чем разница
После того, как выбран метод забора материала от пациента (биопсия, оперативное вмешательство в объеме удаления органа), все выделенные фрагменты должны быть как можно быстрее доставлены в лабораторию патоморфологии. Скорость необходима для того, чтобы приблизить пациента к получению диагноза и незамедлительно начать проведение того или иного терапевтического курса. Ведь существует ряд опухолей (например, некоторые лимфомы), при которых счет идет на дни, а иногда на часы.
Весь материал необходимо погрузить в забуференный 10% формалин в соотношении 1:10 (одна часть материала к 10 частям формалина). Это позволяет непосредственно после операции начать фиксацию тканей, предотвратить их распад и, соответственно, сохранить все структуры материала в неизменном виде до момента просмотра патоморфологом.
Следует знать, что каждый отдельно выделенный фрагмент должен быть помещен в отдельный контейнер с маркировкой. Например, нефрэктомия (удаление почки) с резекцией (иссечением) диафрагмы и выделением регионарных лимфатических узлов. Отдельно помещается почка, отдельно – резецированная часть диафрагмы, отдельно – лимфатические узлы. Или: лимфатические узлы брюшной полости, образование средостения, шейные лимфатические узлы. Недопустимо «смешивать» материал в одном контейнере.
После фиксации, которая занимает от нескольких часов до, что редко, суток, материал отправляется в проводку. На этом этапе он проходит через различные спирты или специализированные растворы, что позволяет подготовить его к работе (обезжирить и дополнительно фиксировать). Существует несколько способов проводки материала. Основные – вакуумная проводка и экспресс. Экспресс проводка длится от 1,5 до 3-х часов, пригодна для любого вида материала и позволяет в наиболее краткие сроки получить готовый к работе образец. Вакуумная проводка длится до 12 часов, позволяет подготовить различные типы тканей, в том числе и наименее фиксированные, а также позволяет «загружать» материал на выходные и получать его в готовом виде в понедельник, что экономит время.
После проводки все образцы заливают в парафин в специальные формы (гистологические кассеты, парафиновые блоки), в которых они застывают. Здесь (в парафине) весь материал хранится вечно.
После заливки в парафин материал поступает в кабинет к лаборантам, где и происходит один из самых важных этапов работы – приготовление гистологических препаратов. На специальных аппаратах – микротомах – лаборант делает срезы с парафиновых блоков толщиной до 1,0мкм и укладывает их на специальные гистологические стекла.
Недаром здесь употреблены слова «важный этап». На сегодняшний момент невозможно представить ни одну лабораторию без хороших лаборантов, на 100% профессионально владеющих своими навыками. Без их полной самоотдачи весь последующий этап (а именно работа врача) сводится на нет. От хорошо приготовленного препарата зачастую зависит половина успеха в постановке диагноза. И это не просто слова. Очень важно получить срез нужной толщины, где клетки лежат в один слой, а не накладываются друг на друга в несколько слоев, создавая ошибочную гиперклеточную картину. Важно видеть весь срез полностью, а не «расплывшийся» или срезанный наполовину или «в складку». Все эти моменты значительно затрудняют процесс диагностики и требуют повторного приготовления препаратов необходимого качества, что так же оттягивает момент постановки диагноза.
После укладывания срезов на стекло (с одного блока один срез на одно стекло) препараты проходят этап рутинной окраски. В настоящее время это окраска гематоксилином и эозином на первом этапе. Затем окрашенные срезы закрываются под покровную пленку, что сохраняет их от повреждения, и подаются врачу. Происходит первичный этап диагностики – описание гистологической картины. Нередко уже на данном этапе при типичной картине можно выставить тот или иной диагноз. Обычно это касается тех случаев, когда материал не содержит опухоли, неинформативен или представлен характерным доброкачественным образованием или же стандартным патологическим процессом (например, воспалением). Однако в большинстве случаев, особенно в диагностике злокачественных процессов, требуется еще несколько этапов работы.
Таковыми являются специальные гистохимические окраски и иммуногистохимическое исследование.
В настоящее время существует множество гистохимических техник, позволяющих выявить тот или иной специфический патологический процесс. Избыточный фиброз (окраска трихромом по Массон или импрегнация серебром), отдельные болезни накопления или наличие специфических гранул в клетках (PAS), туберкулез (окраска по Циль-Нильсену) и т.д. На этом нередко заканчивается весь процесс и диагноз финализирован.
Но описанная простота диагностики лишь кажущаяся. Зачастую патоморфолог сталкивается с опухолями, не имеющими типичной гистологической картины или же не относящимися к определенной их группе. Таковыми являются мелкокруглоклеточные опухоли (лимфомы, нейробластомы, рабдомиосаркомы, нейроэндокринные карциномы и др.), веретеноклеточные опухоли (гемангиомы, шванномы, нейрофибромы, гистиоцитарные саркомы, лейомиосаркомы и т.п.), а так же различные виды аденокарцином или метастазы из невыявленного первичного очага. Прогноз у каждой из приведенных для примера опухолей различен, каждая из них имеет свой прогноз, и для каждой из них свой протокол лечения. Гистологическая картина у них может быть практически одинаковой. И для того, чтобы понять, с чем же мы имеем дело, применяется третий этап диагностики – иммуногистохимическое исследование.
Применение иммуногистохимического исследования возможно не только для постановки диагноза. Данный вид исследования применяется и для определения возможности проведения таргетной (специфической) терапии, а также для определения степени злокачественности образования. Или, в случае метастазов из невыявленного первичного очага, предположить источник метастазирования.
Стоимость и срок исследования
| Наименование | Срок | Стоимость, руб. |
|---|---|---|
| Гистология без иммуногистохимии | от 3 дней | 12 500 |
| Гистология с иммуногистохимией | от 3 дней | 28 300 |
* Организация и оплата доставки сырого материала (не в блоках) осуществляется клиентом.
По всем возникшим вопросам Вы можете проконсультироваться у нашего медицинского администратора по телефону: 8-800-555-92-67 или написать нам в WhatsApp: +7 925 740 05 87
Гистологическое и иммуногистохимические исследования по ОМС, при наличии направления по форме 057/у-04
Уважаемые жители Санкт-Петербурга!
Территориальный фонд ОМС дополнил плановое задание ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздрава России по гистологическим и гистохимическим исследованиям. В результате этот вид исследований выполняется по ОМС, бесплатно (при наличии направления 057/у-04), в том числе и для жителей Санкт-Петербурга.
В 2020 г. патологоанатомическое отделение НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова включено в систему ОМС (обязательного медицинского страхования).
За счет средств территориальных фондов ОМС регионов России (как Санкт-Петербурга, так и остальных субъектов РФ) оплачиваются следующие гистологические и иммуногистохимические исследования:
Исследования 5,6 выполняются при диагнозах злокачественное новообразование молочной железы», «злокачественное новообразование желудка», «злокачественное новообразование бронхов и легкого».
Исследования 7-13 выполняются при диагнозах агрессивные нефолликулярные лимфомы – диффузная крупноклеточная B-клеточная лимфома, первичная медиастинальная B-клеточная лимфома, лимфома Беркитта, острые миелоидные лейкозы, хронический лимфоцитарный лейкоз/лимфома из малых лимфоцитов, лимфома Беркитта у взрослых, лимфома из клеток мантии, лимфома маргинальной зоны, миелодисплатический синдром, хронический миелолейкоз, миелопролиферативные заболевания (МПЗ), протекающие с эозинофилией, множественная миелома, фолликулярная лимфома у взрослых, острые лимфобластные лейкозы.